Съдържание
- Изчисляване чрез прави уравнения на права линия
- Разбиране на уравнението на права линия
- Съвети
- Предупреждения
Използва се спектрофотометър за определяне на концентрацията на определени съединения, като протеин, в разтвор. Като цяло светлина просветва през кювета, пълна с проба. Измерва се количеството светлина, което се поглъща от пробата. Тъй като съединенията абсорбират светлина в различни спектрални диапазони, за анализа трябва да се зададе дясната дължина на вълната. Има много начини да се изчисли концентрацията на неизвестни проби чрез спектрофотометрия, но използването на референтни стандарти дава най-добра точност. Освен това стандартите също посочват дали спектрофотометърът не работи или други проблеми с анализа.
Изчисляване чрез прави уравнения на права линия
Анализирайте референтните стандарти в началото на анализа. Стандартите са известни концентрации и се използват за калибриране на оборудването и проверка на точността. Всички проби трябва да попаднат в работния обхват на стандартите. Ако не, тогава пробите трябва да бъдат разредени или концентрацията на стандартите да се увеличи.
Направете диаграма на разсейване или линейна графика със стандартни показания за концентрация и абсорбция. Концентрацията ще бъде на оста y, а абсорбцията на x-оста. Например, стандартите са 1 ppm, 2,5 ppm и 5 ppm. Дадената абсорбция е 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5, и 5 ppm = .75.
Форматирайте линията на тренда, за да се покаже уравнение на графиката. Уравнението ще покаже формулата y = mx + b. Например, използвайки стандартите в стъпка 2, уравнението е y = .1224x + 0.1531. Повечето линии на тренда се прихващат при нула, но това зависи от аналитичния метод и R-квадратната стойност.
Анализирайте неизвестни проби и запишете показанията на абсорбцията.
Използвайте уравнението (y = mx + b), за да определите концентрацията на пробите.
Разбиране на уравнението на права линия
Нека "Y" е равно на концентрацията. За това ще се реши.
Нека "X" е равно на абсорбцията на пробата. Това е абсорбцията, измерена от спектрофотометъра.
Позволете „” да изравни наклона и “b” да е равно на y-прехващането. И двете са дадени, но ако линията на тренда е била принудена през 0, тогава "b" ще бъде 0.
Разрешава се за концентрация. Използвайки примера в стъпка 3, заместете "x" като дадена абсорбция от .563. Следователно:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (концентрация) = .222011