Съдържание
Спектрофотометрията е безценен инструмент в химията и биологията. Основната идея е проста: различни вещества абсорбират светлина / електромагнитно излъчване по-добре при някои дължини на вълната, отколкото при други. Ето защо някои материали са прозрачни, докато други са оцветени, например. Когато сияете светлина с дадена дължина на вълната чрез разтвор, колкото по-висока е концентрацията му, толкова повече светлина ще поглъща. За да изчислите концентрацията, трябва да сравните показанията си с показанията за стандарти за известна концентрация. Процедурата по-долу е доста обща процедура, написана с учебна лаборатория по химия, но може да бъде модифицирана и за други настройки.
Както винаги, когато работите в лаборатория, облечете очилата, ръкавиците и палтото с дълги ръкави, за да гарантирате собствената си безопасност.
Стиснете гумената крушка, за да я изпразнете от въздуха, след което я поставете върху градуираната си пипета и оставете крушката да се отпусне, така че да засмуква вода в пипетата. След това извадете крушката и затворете горната част на пипетата с пръст; това ще запечата пипетата, така че разтворът вътре да не изтича, докато пръстът ви бъде отстранен. Повдигнете леко ръба на пръста си, за да оставите малко разтвор да изтича от пипетата, докато достигнете желания обем. Практикувайте с малко вода и чаша, за да усетите как работи градуираната пипета. Връзката под раздела „Ресурси“ има филмов клип, който ви показва как да използвате пипета, в случай че никога не сте работили с такъв преди.
Етикетирайте 5 епруветки като стандарти 1-5. Можете да ги маркирате, като използвате лента за писане и химикалка или като използвате маркер за сухо изтриване.
Изберете пет концентрации за вашите стандарти. Искате стандартните концентрации да бъдат разделени една от друга с приблизително един и същ интервал - например 0,1 молара, 0,2 молара, 0,3 молара и т.н. - и в приблизително същия диапазон, какъвто очаквате да бъде ваш непознат. Засега използвайте следните пет концентрации, но не забравяйте, че ще трябва да ги модифицирате, когато извършвате свой собствен експеримент:
Стандарт 1: 0,1 молар Стандарт 2: 0,2 молар Стандарт 3: 0,3 молар Стандарт 4: 0,4 мола Стандарт 5: 0,5 мола
След това вземете 1 моларен стандартен разтвор и добавете следните количества в епруветки 1-5. Не забравяйте, че тези количества се изчисляват с помощта на изброените по-горе концентрации, така че може да се наложи да ги модифицирате според нуждите, когато провеждате свой собствен експеримент.
Стандарт 1: 0.8 милилитра Стандарт 2: 1.6 милилитра Стандарт 3: 2.4 милилитра Стандарт 4: 3.2 милилитра Стандарт 5: 4 милилитра
Изплакнете градуираната пипета, след което прехвърлете следните количества дейонизирана вода:
Стандарт 1: 7,2 милилитра Стандарт 2: 6,4 милилитра Стандарт 3: 5,6 милилитра Стандарт 4: 4,8 милилитра Стандарт 5: 4,0 милилитра
По принцип идеята е количеството на разтвора във всяка епруветка да достигне до 8 милилитра.
Затваряйте всяка от тръбите на стандарт с парафилм и ги обърнете, за да се смесят.
Маркирайте още пет епруветки като "Неизвестно 1-5." Добавете същите количества от вашия неизвестен или тестов разтвор към всеки, както сте използвали с 1 моларен разтвор за стандартите. С други думи, неизвестно 1 ще съдържа 0,8 милилитра тестван разтвор и 7,2 милилитра вода, неизвестно 2 ще съдържа 1,6 милилитра тестван разтвор и 6,4 милилитра вода и т.н.
Затворете всяка от непознатите с парафилм и внимателно обърнете, за да се смеси.
Включете спектрофотометъра и го оставете да се загрее. Необходимото време ще зависи от модела и производителя.
Задайте дължината на вълната на спектрофотометъра. Дължината на вълната ще зависи от типа химикал в експеримента ви. За сега приемете 500 nm, въпреки че не забравяйте, че ще трябва да промените това за различни експерименти.
Калибрирайте вашия спектрофотометър. Процедурата за калибриране ще варира в зависимост от устройството, което използвате. За Spectronic 20, често срещан модел в учебните лаборатории, първо ще настроите машината така, че тя да чете "0 процента T", когато не е заредена кювета, след това да я коригирате, така че да чете "100% T", когато празна кювета, съдържаща дейонизирана заредена е само вода. Тези процедури могат да варират в зависимост от типа машина, която използвате, така че консултирайте се с инструкциите на производителите за подробности.
След калибрирането на машината вземете стандартната 1 епруветка и изсипете съдържанието в чиста кювета, докато стигнат до линията за пълнене. Избършете кюветата с кимпи, за да премахнете всички пръсти или други замърсявания. Поставете кюветата в спектрофотометъра и запишете "% T" отчитането.
Повторете тази процедура за всички 10 проби. БЪДЕТЕ ИЗПЪЛНЕНИ да почистите кюветата между пробите, за да сте сигурни, че резултатите са възможно най-точни.
Вземете резултатите за вашите стандарти и ги въведете в програма за електронни таблици / графики като Excel или OpenOffice.
Използвайки програмата за електронни таблици, разделете 100 процента от всяка от стойностите „% T“ за стандартите, след което вземете дневника на резултата. Това изчисление ще ви даде абсорбцията. Ако въведете формулата, вашата програма за електронни таблици ще направи изчислението за вас.
Пример: Ако% T е 50.6, формулата, която въвеждате в програмата за електронни таблици, ще бъде следната:
дневник (100 / 50.6)
Програмата за електронни таблици ще направи аритметиката.
Направете същото за всички пет неизвестни / експериментални стойности.
Графирайте стойностите на абсорбцията за всичките пет стандарта, с концентрация върху x-ос и абсорбция по y-оста. Използвайки програмата за електронни таблици, поставете линейно уравнение към тази графика. Уравнението ще бъде във формата y = mx + b. Повечето програми за електронни таблици ще имат функция на линейна регресия. Обърнете се към ръководството за потребителя за вашата програма за електронни таблици за подробности относно използването на функцията за линейна регресия.
Вземете уравнението за най-подходящия ред от вашата програма за електронни таблици и го разрешете за y, като извадите b от двете страни и разделете двете страни на m. Резултатът ще изглежда като следния:
(y - b) / m = x
където b и m са стойности, намерени от вашата програма за електронни таблици.
Проверете стойностите на абсорбцията си за неизвестните и изберете три, които попадат приблизително в същия диапазон като стандартите. Използвайте тези три стойности на абсорбция за останалите си изчисления. Ако всичките пет попадат в същия диапазон като стандартите, можете да използвате всичките пет вместо това, но трябва да използвате поне три.
Включете всяка от трите стойности на абсорбция в уравнението си вместо y. Не забравяйте, че вашето уравнение е в следната форма:
(y - b) / m = x
Така че, вие искате да включите стойността на абсорбцията за всяко непознато в уравнението вместо y, след което да изчислите x. Можете да използвате програмата за електронни таблици, за да направите това изчисление за вас и да го направите по-бързо. Вече изчислихте концентрацията на интересуващия химикал в три от вашите разредени неизвестни. Оригиналният разтвор обаче беше разреден за приготвяне на тези неизвестни, така че сега трябва да работите назад и да изчислите концентрацията на първоначалния разтвор въз основа на коефициента на разреждане.
Всяка неизвестна проба, която сте поставили в спектрофотометъра, е била разредена с различно количество. Следователно, сега трябва да разделите концентрацията, която сте изчислили, въз основа на абсорбцията за всяко неизвестно отчитане на следното:
Неизвестно 1: Разделяне с 0,1 Неизвестно 2: Разделяне с 0,2 Неизвестно 3: Разделяне с 0,3 Неизвестно 4: Разделяне с 0,4 Неизвестно 5: Разделяне с 0,5
Не забравяйте обаче, че тези цифри се основават на предположението, че използвате разрежданията, описани по-горе. Не забравяйте да промените тези стойности, ако сте разредили пробите си с различно количество.
Добавете резултатите си заедно и ги разделете на броя резултати. Това ще ви даде средна стойност. Отчетете това число като заключение за концентрацията на оригиналния разтвор.