Съдържание
Високоефективната течна хроматография (HPLC) е лабораторна техника, използвана за разделяне и идентифициране на съединенията. Това е вид колонна хроматография, която разчита на различни полярности на съединенията в разтвор, за да ги раздели. HPLC се различава от стандартната колонна хроматография, тъй като използва налягане, за да принуди разтвора през колоната по-бързо и следователно дава по-бързи, а понякога и по-точни резултати. Целта е да се отделят съединенията в колоната и да се накарат те да излязат отделно.
Coelution
Поради скоростта на HPLC и разчитането на различни полярности на съединенията, две съединения с подобна структура и полярности могат да излязат от хроматографския апарат едновременно или почти по едно и също време. Това е известно като coelution. Съобразяването затруднява определянето на точно коя част от сместа, елуирана в този момент.
Адсорбирани съединения
HPLC обикновено използва стъклена колона, пълна с мъниста, изработени от различни материали. Смесите, принуждавани през колоната, имат химикали, които се свързват с различна якост на мънистата. Силата на свързването, която зависи от сходството в полярността, определя колко дълго химикалът ще се свърже с топчето, преди да се освободи. Някои съединения се свързват толкова силно, че по същество никога не се отделят от зърната в колоната и никога не се измерват в разтвора, излизащ от колоната.
цена
Типичните техники за лабораторно разделяне включват разработване на анализ или метод за разделяне и след това прилагане на този анализ за отделяне на отделни съединения от разтвор. Това обикновено води до множество решения, които също трябва да преминат през процедури, което води до експоненциално увеличаване на сложността. Въпреки че HPLC често може да опрости и ускори този процес, разходите за разработване на HPLC апарат могат да станат огромни. Разработването на HPLC апарат, макар и много по-ефективно, е много по-скъпо, отколкото разработването на други анализи за разделяне на съединенията. Това го прави финансово неспособен за много малки лаборатории в частна собственост.
Сложност
HPLC не се използва само за разделяне на прости съединения, но също така се използва за изолиране на специфични протеини от клетъчна смес. В този случай топчетата в колоната обикновено са покрити с антитяло, специфично за протеина, който трябва да съберете. Протеините свързват антителата и останалият разтвор се пропуска през колоната, след това протеините се освобождават с помощта на друг разтвор и се събират. Това изисква висококвалифициран техник да наблюдава колоната по всяко време и да се увери, че процесът протича точно както е планирано.