Съдържание
- Предимство: Чувствителност
- Предимство: Специфичност
- Недостатък: Склонен към фалшиви или субективни резултати
- Недостатък: висока цена и техническо търсене
Western blot, аналитична техника, използвана за определяне на специфичен протеин в дадена проба, използва способността на първично антитяло, белязано с ензим или флуоресценция, да се свързва със специфичния си антиген. Това е триетапен процес, започващ с гел електрофореза, последван от блотиране на мембраната и сондиране с антитела. Детекцията на протеин може да бъде директна или индиректна, като последното използва белязано вторично антитяло, насочено срещу първичното. Въпреки че е приет като рутинна техника за анализ на протеини, Western blot има ограничения, както и предимства.
Предимство: Чувствителност
Един от най-големите аргументи в полза на Western blot е неговата чувствителност. Поради способността си да открива само 0,1 нанограма протеин в проба, техниката теоретично може да служи като ефективно средство за ранна диагностика, усещайки дори най-малкия имуногенен отговор от вирус или бактерии в пациентска проба. Индиректният западен блот допълнително надгражда тази чувствителност от способността на вторичното антитяло да усилва интензивността на сигнала, открит от системата за образна диагностика. По-голямата чувствителност означава, че за тестване са необходими по-малко антитела, което намалява значително разходите за лаборатория.
Предимство: Специфичност
Техниката на Western blot дължи своята специфичност на два големи допринасящи фактора. Първо, гел електрофорезата сортира проба в протеини с различна големина, заряд и конформация. Този процес сам по себе си е огромна стъпка към откриването, тъй като лентите, образувани в гела, вече дават улики за размера на белтъка или полипептида от интерес. Специфичността на взаимодействието антитяло-антиген служи като вторият голям фактор. Тъй като специфичните антитела показват афинитет към специфични протеини, процесът може селективно да открие целевия протеин дори в смес от 300 000 различни протеини.
Недостатък: Склонен към фалшиви или субективни резултати
Въпреки чувствителността и специфичността си, западното петно все още може да доведе до грешни резултати. Лъжливо-положителни резултати, когато антитялото реагира с непредназначен протеин, което често се случва, когато пациент, който се тества за ХИВ, има туберкулоза или редица паразитни инфекции. От друга страна, фалшиво отрицателен може лесно да се получи, ако на по-големите протеини не се даде достатъчно време за правилно пренасяне в мембраната. Неправилното попиване и обработка често произвеждат изкривени, избледнели или дори множество ленти, което прави резултатите от тестовете да бъдат интерпретирани от техника.
Недостатък: висока цена и техническо търсене
Цената на уестърн блот е съставна част от големите индивидуални разходи за маркирани антитела, квалифицирани анализатори и лабораторно оборудване. Деликатен процес, западното блотиране изисква точност във всяка стъпка за правилното идентифициране на съставките на пробата. Незначителна грешка в концентрацията на реагента или в инкубационния период може да бъде пагубна за целия процес. И накрая, оборудването, необходимо за откриване и изобразяване - хемилуминесцентни, флуоресцентни, радиоактивни или лазерни системи за детектиране - може да бъде твърде скъпо за средното устройство за микробиология.