Съдържание
- По-добра визуализация
- Идентификация и класификация
- Откриване на жизнеспособност
- Идентифициране на клетъчни структури
Микробиолозите изучават характеристиките на микроорганизми като водорасли, протозои, бактерии, гъби и вируси, използвайки микроскоп. Докато някои организми като протозои и клетки от дрожди са лесни за наблюдение с мокър монтаж, бактериалните клетки изискват оцветяване. Учените разработиха няколко метода като оцветяване по Грам, бързо оцветяване с киселина и флуоресцентно оцветяване за по-добра визуализация на бактериалните клетки и клетъчните структури. С помощта на такива методи за оцветяване е възможно да се идентифицират структурни характеристики, които помагат за класифицирането на бактериите.
По-добра визуализация
Бактериалните организми са толкова малки, че повечето от тях са видими само под микроскоп със сила на увеличение 1000X. Самото увеличение на размера обаче не осигурява достатъчна степен на яснота, така че бактериите трябва да бъдат оцветени преди наблюдение, за да се осигури яснотата, необходима за визуализация.
Идентификация и класификация
Оцветяването на бактериите за разграничаване между бактериалните видове е известно като диференцирано оцветяване. Петното по Грам е едно такова диференциално петно, което различава бактериите въз основа на съдържанието на тяхната клетъчна стена. При този метод бактериалните клетки реагират с кристално виолетово петно, за да придобият виолетов цвят. При добавяне на обезцветител някои бактериални клетки губят цвят, докато други не. При добавяне на петно от сафранин, обезцветените клетки поемат петното, за да изглеждат червени, докато бактериалните клетки, които не са загубили цвят, остават виолетови. Бактериалните клетки, които приемат червения цвят, се наричат грамо отрицателни организми, а тези, които не приемат цвета, се класифицират като грамположителни организми. Оцветяването по грам осигурява бърз метод за първоначална идентификация на бактерии, участващи в инфекции. По същия начин, процедурата за бързо оцветяване с киселина помага да се идентифицират специфично организмите, принадлежащи към класа бактерии, наречен Mycobacteria, като Mycobacterium tuberculosis.
Откриване на жизнеспособност
В пробите от бактериална култура често е важно да се открие наличието на живи бактериални клетки. Методите за оцветяване като флуоресцентно оцветяване помагат да се определи дали културните клетки са жизнеспособни или не. Живите бактерии имат способността да превръщат петното от 5-циано-2,3-дитолил тетразолиев хлорид (CTC) в багрило, което показва червена флуоресценция. Следователно, когато културите, оцветени с СТС, отделят такава флуоресценция, това показва наличието на жизнеспособни бактерии. Пропидиевият йодид е петно, което действа само върху неживи клетки, които притежават повредени мембрани, и следователно е полезно за идентифициране на мъртви бактериални клетки.
Идентифициране на клетъчни структури
Оцветяването осигурява метод за ясно визуализиране на няколко клетъчни структури. Например, методът за оцветяване с гориво позволява идентифициране на ядрото в бактериалните клетки, докато Албертовото петно е полезно за визуализиране на метахроматични гранули. По подобен начин техниката за импрегниране на сребро позволява идентифициране на спирохети. Джуджетата са лесно забележими, когато са оцветени с петна на Рю. Оцветяването с малахитово зелено помага да се идентифицират бактериалните спори.