Химиците използват високоефективна течна хроматография или HPLC за разделяне на смеси от съединения. По принцип методът се състои в инжектиране на проба в колона, където се смесва с един или повече разтворители. Различни съединения адсорбират или "залепват" към колоната в различна степен; и тъй като разтворителят изтласква съединенията през колоната, един от компонентите на сместа ще излезе първо от колоната. Инструментът открива съединенията, когато излизат от колоната и произвежда хроматограма, която се състои от диаграма с време на задържане на x-ос и интензитет на сигнала от детектора на y-оста. Тъй като съединенията излизат от колоната, те произвеждат "пикове" в хроматограмата. Като цяло, колкото по-далече и по-тесни са върховете в хроматограмата, толкова по-висока е разделителната способност. Учените смятат разделителна способност от 1.0 или по-висока за адекватно разделяне.
Измерете ширините на два съседни пика в хроматограмата, като отбележите, където стойностите на оста x са в основата на всеки пик. Оста x представлява време на задържане, обикновено се измерва в секунди. По този начин, ако пик започва в 15,1 секунди и завършва на 18,5 секунди, широчината му е (18,5 - 15,1) = 3,4 секунди.
Определете времената на задържане, като отбележите времето, т.е. местоположението на оста x, което съответства на местата на максимумите на върховете. Тази стойност обикновено е около половината между двете стойности, използвани за изчисляване на ширината в стъпка 1. Примерът, даден в стъпка 1, например, би показал максимум за около 16,8 секунди.
Изчислете разделителната способност R между два пика по
R = (RT1 - RT2) /,
където RT1 и RT2 представляват времена на задържане на пикове 1 и 2, а W1 и W2 представляват ширините на върховете, взети в техните основи. Продължавайки примера от стъпки 2 и 3, един пик показва време на задържане от 16,8 секунди и ширина 3,4 секунди. Ако вторият пик показва време на задържане 21,4 секунди с ширина 3,6 секунди, тогава разделителната способност ще бъде
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.