Съдържание
Оценете количествено вашата РНК проба чрез измерване на нейната абсорбция на ултравиолетова светлина (UV). Нано-капка спектрофотометър ще използва само един или два микролитра от вашата проба, които можете да възстановите. Други спектрофотометри изискват много по-голяма проба. Коефициентът на изчезване за нуклеотиди при UV дължина на вълната 260 nm при светлинен път от 1 см е 20. Въз основа на този коефициент на изчезване абсорбцията на 40 µg / ml РНК при същите условия е една. Използвайки тази информация, можете да изчислите концентрацията на вашата РНК проба.
Направете разреждане, ако е необходимо, на вашата проба. Стандартно разреждане на микрокувета е 1:40. Направете това разреждане, като добавите 2 pL РНК проба към стерилна вода 78 ul.
Следвайте протоколите на вашия конкретен спектрофотометър, за да калибрирате машината, като използвате заготовка и след това определете оптичната плътност на вашата проба при дължина на UV вълната от 260 nm.
Умножете абсорбцията на вашата проба по коефициента на разреждане с 40 μg RNA / ml. Уравнението ще бъде: „Концентрацията на РНК (µg / ml) = (OD260) x (коефициент на разреждане) x (40 µg RNA / ml) / (1 OD260 единица)“ (Hofstra.edu) Например: Ако сте разредили пробата си с 1:40 и отчитането на абсорбцията ви беше 0,08, ще умножите 0,08 x 40 x 40 = 128 µg / ml = 0,13 µg / μL
Отбележете чистотата на вашата проба, като вземете още едно отчитане на абсорбцията при 280nm UV дължина на вълната. Съотношението OD 260 / OD 280 ще покаже дали - и на какво ниво - вашата проба е замърсена с протеин или фенол. Резултат от 1.8 до 2.0 показва качествена РНК.