Съдържание
- Разреждане на проби, плакиране и инкубация
- Ръчно броене
- Автоматично броене
- Да направим броенето по-сложно
Един от класическите начини за определяне на концентрацията на микроби в пробата е разреждане на пробата, отглеждане на микробите върху плаки и преброяване на колониите. Покритите микроби растат от образуваща колония единица, състояща се от една или повече клетки, във видима колония, която може да се види и преброи. Бактериите са най-често срещаният микроб за оценка на броя на плочите. Броят на колониите се използва за откриване и преброяване на микроби в почвата, водата и храната. Протоколите за преброяване на колонии подчертават точния и методичен подход.
Разреждане на проби, плакиране и инкубация
Ако просто намажете проба от микроби върху агарова плоча, ще видите толкова много колони образуващи колонии, че отделните колонии ще се смесват, което ги прави невъзможни за преброяване. За да разрешите този проблем, смесете пробата в течна среда, вземете малко количество от тази смес и допълнително я разредете. Повторете този процес шест до 10 пъти. Разпределете окончателното разреждане върху агарова плака и го инкубирайте в продължение на четири до седем дни, преди да преброите колониите.
Ръчно броене
Основният трик при броенето на колонии е да се преброят всяка колония точка. Един от подходите е да се постави чашката на Петри на фона на решетката и да се преброят колониите във всяка решетка, като се движат по методичен модел през всички клетки. Маркирането на преброените колонии на гърба на чашката на Петри също може да бъде полезен подход. Като цяло ще трябва да преброите поне три плочи; използвайте само плочи, съдържащи 30 до 300 колонии, за да направите стабилни заключения, предполага Microbiology Network, фирма, която предоставя консултантски услуги на лаборатории и производители. Плочките с колонии, които са твърде многобройни, за да се броят или с твърде малко колонии, трябва да бъдат презасадени от ново разреждане.
Автоматично броене
Човешката грешка добавя към времето, свързано с ръчно броене на колонии. За да подобрите както точността, така и ефективността, поставете чашата на Петри в устройство за броене на колонии. Автоматизираните броячи на колонии правят снимка на ястието, отделят колониите от фона и след това използват алгоритъм за преброяване на колониите в чинията. Алгоритмите могат да имат затруднения при разграничаването на колонии, когато две или повече колонии докосват в краищата, така че това е област на текущо разработване на софтуер.
Да направим броенето по-сложно
Точността на изчисляване на плътността на микробите от броя на колониите има някои ограничения. Колонообразуващите единици могат да бъдат единична клетка, верига от клетки или цяла група клетки. Предположението е, че една колония представлява една клетка, така че концентрациите, изчислени от броя на колониите, могат да бъдат ниски. Различните микроби се нуждаят от различни условия на растеж и колониите в плочата представляват само онези микроби, които процъфтяват върху тази среда за растеж при тези условия на инкубация. В допълнение, преброяването на колонии не регистрира мъртви клетки, което е важно, когато се нуждаете от концентрацията на клетките в първоначалната проба.