Съдържание
Течната хроматография с висока ефективност е техника за лабораторния анализ на смес. Това е ефикасен тип хроматография, която използва високо налягане, а не просто гравитация, за задвижване на проба от смес през колона. Пробата се инжектира, след това помпа, съдържаща високо количество налягане, помага да се движи пробата по опакована колона, където тя се разделя на отделни компоненти. След това разделянето се анализира от детектор, за да се получат резултати.
Сайт за инжектиране
За да се инжектира в HPLC, пробата първо трябва да бъде разтворена в полярен течен разтворител, за предпочитане такава с известни HPLC спектри, така че нейните данни да могат да бъдат разграничени от пробите. Течният разтвор, съдържащ пробата, се поставя в инструмента и се изпраща в колоната. Реалното местоположение на мястото на инжектиране зависи от марката инструменти. В повечето случаи процесът на инжектиране е автоматизиран, но в някои случаи лаборантът трябва да инжектира пробата с помощта на малка игла за спринцовка.
Компонент на помпата
Помпеният компонент на HPLC модула е необходим, тъй като осигурява налягането, което задвижва пробата през колоната. Силата на помпата варира, но мощният може да създаде налягане до 6000 psi или фунта на квадратен инч, което се прилага след инжектиране на пробата. Това позволява пробата да премине през колоната по-бързо и ефикасно, отколкото ако се пропуска чрез използване само на силата на гравитация.
Описание на колоната
Увеличената скорост на проба, преминала през колоната чрез помпа, позволява използването на различен тип колона от използваната при обикновена течна хроматография. Опаковъчният материал в колоната може да има много по-малък размер на частиците, което увеличава повърхностната площ и следователно подпомага взаимодействието на пробата с колоната. Повечето HPLC колони работят чрез полярност. Пробата се разтваря в полярен разтворител и колоната е съставена от до голяма степен неполярни въглеводороди. Полярните части на молекулата на пробата преминават през колоната много бързо, защото те взаимодействат основно с разтворителя, докато пробите неполярни компоненти се задържат в колоната, образувайки слаби взаимодействия с компонентите на колоната. Следователно компонентите на пробите излизат от колоната в ред от повечето полярни до повечето неполярни.
Функция детектор
Детекторите също варират в зависимост от типа на използвания HPLC инструмент. Повечето обаче функционират по същия основен начин. Източник на ултравиолетова светлина свети върху отделните компоненти на пробата, когато те излизат от колоната. Повечето органични съединения поглъщат определено количество светлина, така че когато преминават покрай приложената светлинен лъч, детектор може да вземе колко светлина се абсорбира. Детекторът също записва времето за задържане на компонентите въз основа на реда, в който те излизат от колоната. След това този резултат може да бъде анализиран въз основа на площта на пика, за да се определи точния характер на компонентите на пробите.