Съдържание
Бактериите се отглеждат в чаши на Петри върху твърда среда, известна като бактериален агар, където се образуват кръгли колонии. За разлика от отделна бактериална клетка, колония е група от бактерии, достатъчно големи, за да бъдат видими с просто око. Растежът на бактериите може да бъде измерен чрез просто наблюдение на това колко колонии присъстват; обаче, по-количествените методи включват използването на преброяваща камера или по-често жизнеспособни броя на плочите. Последният се използва най-често, тъй като предоставя и качествена информация, като ефектът от различни условия на растеж. Тъй като може да има милиарди бактерии в петрие, измерването първо изисква разреждане на пробата, така че да е възможно да се преброят броя на колониите.
В епруветка се добавят 10 микролитра от изходната бактериална култура към 90 микролитра разредителна среда. Затворете плътно капака на тръбата и леко завъртете, за да получите хомогенна смес. Сега пробата е една десета от първоначалната й концентрация.
Прехвърлете 10 микролитра от тази нова проба в нова епруветка, съдържаща 90 микролитра разредителна среда, разбъркайте отново. За пореден път резултатът ще бъде допълнително разредена пробата - сега тя ще е една стотна от първоначалната й концентрация. Повторете това няколко пъти, докато оригиналната проба не се разрежда между 104 и 1010 пъти. Уверете се, че всяка епруветка е маркирана с правилното разреждане, например 10-1, 10-2 и така нататък.
Разпределете 10 микролитра от последното разреждане, завършено върху плочата с агар. Използвайки ръба за разпространение, разпределете бактериалния разтвор по цялата повърхност на агарната плоча. Повторете това за още две плочи. Обичайно е да се изпълнят тези стъпки с други нива на разреждане за сравнение. Уверете се, че етикетирате дъната на чиниите. Поставете капаците на всяка чиния и оставете агаровите плочи да изсъхнат няколко минути на лабораторна пейка под пламък, или в инкубатор. Поставете плочите в инкубатора, който трябва да бъде настроен на подходящата температура за щама на бактериите. Оставете да расте за 12-16 часа.
Колониите трябва да са видими след 16 часа; някои генетични модификации обаче могат да изискват по-дълги (например, цветно развитие). Когато колониите се наблюдават, извадете плочите и намерете такива, които имат между 30 и 300 колонии. Използвайки перманентен маркер, поставете точка на дъното на чашката на Петри - отстрани с агара, а не на капака - навсякъде, където се вижда колония през агара. Пребройте всяка точка от маркера. Повторете за всяко ястие.
За да се измери количеството бактерии в изходната култура за този експеримент, разреждането трябва да се обърне при изчисленията на две места. Първо, когато сте взели един микролитър от епруветката, за да поставите в чашата на Петри, сте взели една десета от разредената проба, така че трябва да умножите всичко по 10, за да обърнете това. Освен това, ако коефициентът на разреждане в епруветката е например 10-7 , тогава броят на колониите трябва да се умножи по 107 за да се обърне ефекта на разреждане. Просто премахнете отрицателния знак от експонента в изчисленията. Използвайте формулата:
× 10 × = Брой образуващи колонии единици (CFU) на милилитър изходна култура. Това е бактериалният растеж във вашите петри.