Съдържание
- TL; DR (Твърде дълго; Не четях)
- Какво е електрофореза?
- Незадоволителен препарат за гел
- Твърде много проба
- Лоша качествена проба
Замисляли ли сте се как учените изучават малки фрагменти като вашата ДНК? Един от методите е гел електрофорезата. Докато електрофорезата обикновено произвежда ясни, лесни за четене ленти, идеални за научна интерпретация, намазаните резултати понякога затъмняват данните.
TL; DR (Твърде дълго; Не четях)
Гел електрофорезата позволява на учените да визуализират усвоените проби и да измерват размерите на фрагментите. Намазването на резултатите от неправилно приготвени агарозни гелове, зареждане на неразредена проба в ямките или използване на проби с лошо качество.
Какво е електрофореза?
Гел електрофорезата е начин за учените да визуализират усвоени проби от малки молекули като ДНК и да оценят размерите на тези фрагменти. За да извършат електрофореза, учените подготвят гел чрез суспендиране на агароза във вряща вода. Получената полимеризация произвежда кръстосани захарни полимери, така че гелът прилича малко на паяжина на химическо ниво.
Учените използват инструмент за рязане, за да образуват кладенци в гела, така че да могат да заредят много малки количества усвоени проби в ямките. Включването на машината води до преминаване на електричество през гела и фрагментите в пробите започват да пътуват от кладенците до другата страна на гела. Тъй като гелът е подобен на мрежата, по-малките фрагменти преминават бързо през матрицата, докато по-големите фрагменти отнемат повече време, за да се изкачат през матрицата. Когато приключи, гелът съдържа тъмни ленти, представящи колко далеч са пътували различни фрагменти. Учените измерват тези ленти и използват логаритмично изчисление, за да определят размера на всеки фрагмент въз основа на това докъде е мигрирал.
Учените се надяват на ясни ленти, но понякога лентите се размазват. Това намазване обикновено е резултат от лошо подготвени гелове, зареждане на неразредени проби в ямките или проби с лошо качество.
Незадоволителен препарат за гел
Когато става въпрос за намазани резултати, един вероятен виновник е лошо приготвен гел. Задоволителен гел полимеризира равномерно, създавайки равномерна матрица в целия гел в леещата тава. Ако част от гела - обикновено долната половина - се постави преди ученият да довърши изливането на цялата тава, полученият гел ще бъде неравен и ще доведе до намазани резултати.
Твърде много проба
Преди да заредите проби в ямките, тези проби трябва да се разреждат достатъчно, за да преминат през гела, без да се преливат кладенците. Ако заредена проба е твърде концентрирана, защото ученият забрави да я разрежда или използва неправилен коефициент на разреждане, фрагментите ще бъдат твърде големи за кладенците и ще получат размазване.
Лоша качествена проба
Намазването също е резултат от лошо качество на пробата. Например, ДНК проба, замърсена с протеин или съдържаща твърде много сол, може да доведе до размазване. Деградираните или денатурирани проби също дават лоши резултати, включително намазани ленти.
Гел електрофорезата е удивителен начин за учените да визуализират усвоените проби и да определят размера на фрагмента. Внимателното приготвяне както на гела, така и на пробата минимизира възможността за размазване и дава ясни ленти, идеални за научна интерпретация.